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    雞免疫球蛋白Y(IgY)酶聯免疫分析試劑盒操作步驟
    瀏覽次數:266發布日期:2022-06-21

    雞免疫球蛋白Y(IgY)酶聯免疫分析試劑盒操作步驟


    雞免疫球蛋白Y(IgY)酶聯免疫分析試劑盒操作步驟

    本試劑盒僅供研究使用。


    實驗原理  

    本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中雞免疫球蛋白Y(IgY)水平。用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被的微孔中依次加入免疫球蛋白Y(IgY),再與HRP標記的抗原結合,形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的免疫球蛋白Y(IgY)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中雞免疫球蛋白Y(IgY)濃度。


    雞免疫球蛋白Y(IgY)酶聯免疫分析試劑盒組成

    130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶

    2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(40μg/ml)0.5ml×1瓶

    3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶

    4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份

    5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張

    6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個


    雞免疫球蛋白Y(IgY)酶聯免疫分析試劑盒操作步驟標本要求

    1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

    2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。


    雞免疫球蛋白Y(IgY)酶聯免疫分析試劑盒操作步驟

    1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

    20μg/ml5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

    10μg/ml4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

    5μg/ml3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

    2.5μg/ml2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

    1.25μg/ml1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

    2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品*終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

    3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

    4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

    5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

    6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

    7.溫育:操作同3。

    8.洗滌:操作同5。

    9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.

    10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

    11.測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

    計算

    以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。



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