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    人組蛋白H2B(HISTON-H2B)ELISA試劑盒的應用
    瀏覽次數:310發布日期:2022-06-08

    人組蛋白H2B(HISTON-H2B)ELISA試劑盒的應用


    檢測原理

    試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被樣本抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的樣本呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。


    樣品收集、處理及保存方法

    1.血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

    2.血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

    3.細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

    4.組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。


    操作步驟

    1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

    2.設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

    3.樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。

    4.除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

    5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

    6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

    7.每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。


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    結果判斷

    繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。


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